猪肺炎支原体SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作     者：闫微 杨柳 龙云志 宋文博 李倩倩 余道兵 周明光 徐高原 黄超 汤细彪 Yan Wei;Yang Liu;Long Yunzhi;Song Wenbo;Li Qianqian;Yu Daobing;Zhou Mingguang;Xu Gaoyuan;Huang Chao;Tang Xibiao

作者机构：武汉科前生物股份有限公司湖北武汉430070 

基　　金：国家重点研发计划项目(2022YFD1800902) 

出 版 物：《中国动物检疫》 (China Animal Health Inspection)

年 卷 期：2024年第41卷第2期

页      码：72-79页

摘      要：为建立一种快速高效的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)检测方法,根据NCBI公布的Mhp保守序列设计4对特异性引物,依据4对引物的荧光定量PCR检测结果及拟合曲线进行相关性分析,筛选出最佳引物(SX4),建立了Mhp SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法。该方法可特异性检测Mhp,对猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、副猪嗜血杆菌4型及链球菌2型等病原均无特异性扩增;最佳引物SX4检测的灵敏度可达4.9×10^(1) copies/μL,组内和组间变异系数均小于2%。该方法可稳定检测出工艺生产抗原和市售疫苗中的Mhp菌量。试验表明,本研究成功建立了Mhp SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法,其特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于Mhp疫苗抗原生产和临床疫苗中的Mhp菌量检测。

主 题 词：猪肺炎支原体 荧光定量PCR 颜色改变单位(CCU) 相关性 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-944X.2024.02.013

馆 藏 号：203126123...