禽源沙门氏菌荧光定量PCR方法的构建及应用

作     者：孙少迪 田堯 高艺玮 牛灵玥 杜阳洋 王文静 钟菊花 唐小群 刘俊琦 周望平 SUN Shaodi;TIAN Yao;GAO Yiwei;NIU Lingyue;DU Yangyang;WANG Wenjing;ZHONG Juhua;TANG Xiaoqun;LIU Junqi;ZHOU Wangping

作者机构：湖南省畜牧兽医研究所湖南长沙410131 湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 

基　　金：湖南现代农业产业技术体系项目 湖南省农业农村厅直属单位省级专项项目 

出 版 物：《湖南畜牧兽医》 (Hunan Journal of Animal Science & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2024年第1期

页      码：41-45页

摘      要：试验旨在建立一种快速检测禽源沙门氏菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR(qPCR)的方法,即根据沙门氏菌invA基因的保守序列设计引物,利用普通PCR方法扩增沙门氏菌invA基因保守基因片段,将其克隆到pMD18-T载体上,将获得的重组质粒pMD18-T-invA作为标准阳性模板。经qPCR条件优化后,进行特异性、灵敏性和重复性试验。结果显示,所建立的SYBR Green Ⅰ qPCR方法的Ct值与标准品在1.4~1.4×10^(10)拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,R2为0.9963,扩增效率为95%,检测下限为1.4拷贝/μL;与大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、痢疾志贺菌、多杀性巴氏杆菌无交叉反应;该方法组内变异系数和组间变异系数均小于2.5%;对44份粪便样本和132份蛋液样本进行qPCR方法和常规PCR方法检测,结果显示该qPCR方法的阳性检出率分别为22.7%(10/44)、0.8%(1/132),常规PCR的阳性检出率分别为9.1%(4/44),0%(0/132)。结果表明:试验成功建立禽源沙门氏菌qPCR检测方法,可为禽源沙门氏菌的快速检测提供技术支撑。

主 题 词：沙门氏菌 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR invA基因 检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-4907.2024.01.013

馆 藏 号：203126132...