柑橘溃疡病菌LAMP实时浊度检测方法的建立及应用

作     者：封立平 孔德英 孙涛 孙冬 纪瑛 王简 FENG Liping;KONG Deying;SUN Tao;SUN Dong;JI Ying;WANG Jian

作者机构：山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心山东青岛266002 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心重庆400020 

基　　金：质检总局科研项目(No.2009IK254 2011IK186 2011IK286) "十二五"国家科技支撑计划课题(No.2012BAK11B02) 

出 版 物：《热带作物学报》 (Chinese Journal of Tropical Crops)

年 卷 期：2015年第36卷第6期

页      码：1153-1160页

摘      要：以柑橘溃疡病菌特异性高的假定蛋白基因(登录号:AE008923.1)为靶标,设计并筛选4条引物来特异性识别靶标序列中的6个独立区域,建立柑橘溃疡病菌LAMP实时浊度检测方法。该方法利用实时浊度仪检测反应过程中产生的焦磷酸镁白色沉淀,实现对LAMP整个反应过程的实时监控。从镁离子浓度、甜菜碱浓度、d NTPs浓度、引物浓度和反应温度5个变量参数对LAMP检测体系进行优化,并对方法的特异性、灵敏度、稳定性及实际样品检测效果进行评价。结果显示,该体系经优化后稳定性良好,可在66℃恒温条件下,60 min内完成检测;DNA检测下限可达0.02 ng/μL,灵敏度与荧光定量PCR方法相同,比常规PCR方法高1个数量级;能快速、准确地对田间疑似样品进行检测,与荧光定量PCR方法的检出情况一致,没有漏检。结果说明柑橘溃疡病菌实时浊度LAMP检测方法操作简便、所需时间短,特异性与灵敏度高,为柑橘溃疡病菌的快速筛查提供较好的途径。

主 题 词：LAMP实时浊度检测方法 柑橘溃疡病菌 检测 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 090402[090402] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-2561.2015.06.023

馆 藏 号：203126205...