蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的原核表达纯化及ELISA方法鉴定

作     者：王丹 康晓平 郝淮杰 郑玉玲 姜永强 杨银辉 陈福生 WANG Dan;KANG Xiao-Ping;HAO Huai-Jie;ZHENG Yu-Ling;JIA NG Yong-Qian;YANG Yin-Hui;CHEN Fu-Sheng

作者机构：华中农业大学食品科技学院湖北武汉430070 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 

基　　金：国家科技重大专项(2009ZX10601) 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2011年第22卷第5期

页      码：636-639,666页

摘      要：目的:构建蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的融合蛋白原核表达质粒GSTpET-30a(+)/TBE-E-D3,在大肠杆菌中诱导表达并用亲和层析法纯化,以获得特异性诊断抗原。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因克隆技术构建重组质粒,转入大肠杆菌DH5α后经酶切鉴定,将测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后进行亲和层析法纯化,SDS-PAGE分析其表达情况和纯度,间接ELISA法鉴定重组蛋白的特异性和灵敏度。结果:TBE-E-D3基因目的片段以正确的读框插入载体GSTpET-30a(+),通过IPTG诱导在大肠杆菌中正确表达,亲和纯化得到较高纯度的蛋白质;间接ELISA法证明抗原特异性和灵敏度良好,送检的15份阳性患者血清样本中检出10份阳性结果,40份健康人血清样本中检出1份假阳性结果。结论:获得的His-TBE-E-D3融合蛋白具有良好的抗原性,可作为森林脑炎病毒特异性血清学诊断的备选抗原之一。

主 题 词：蜱传脑炎病毒 TBE-E-D3抗原 原核表达 纯化 特异性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 1001[医学-基础医学] 08[工学] 09[农学] 100102[100102] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2011.05.008

馆 藏 号：203126459...