小鼠Bpi条件基因打靶载体的构建和鉴定

作     者：康赟 林福玉 滕艳 侯宁 程萱 吕喆 孔庆利 安云庆 KANG Yun;LIN Fu-yu;TENG Yan;HOU Ning;CHENG Xuan;Lü Zhe;KONG Qing-li;AN Yun-qing

作者机构：首都医科大学基础医学院免疫学教研室北京100069 军事医学科学院生物工程研究所北京100071 

基　　金：北京市自然科学基金(7082016)资助项目 "十一五"国家科技支撑计划重点项目经费资助(2006BAI23B02) 

出 版 物：《实验动物科学》 (Laboratory Animal Science)

年 卷 期：2010年第27卷第4期

页      码：15-20页

摘      要：目的构建小鼠Bpi条件基因打靶载体,为建立Bpi条件基因打靶小鼠模型和深入研究Bpi基因功能奠定基础。方法采用Cre/LoxP系统,选择小鼠Bpi基因第2、3外显子作为条件性敲除的目的片段,并在其两侧插入LoxP位点;运用LA-PCR技术,以129品系小鼠ES细胞基因组DNA为模板分步扩增包括Bpi第2、3外显子(中间同源臂)和上游同源臂在内的3.1 kb基因片段以及下游同源臂4.9 kb基因片段;构建pBSKⅡ-5SLoxP和ploxPFRTNeo-3L重组质粒,将前者酶切产物(3.1 kb)与酶切后的ploxPFRTNeo-3L质粒相连获得Bpi条件基因打靶载体。结果经多个限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的pBSKⅡ-5SLoxP、ploxPFRTNeo-3L重组质粒和Bpi条件基因打靶载体结构正确,与设计相符。结论成功构建了小鼠Bpi条件基因打靶载体。

主 题 词：杀菌/渗透性增强蛋白(Bpi) 条件基因打靶载体 同源重组 Cre/LoxP系统 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-6179.2010.04.004

馆 藏 号：203126511...