分子信标实时荧光定量PCR构绵羊PrP基因质粒和标准曲线

作     者：王川 吴润 李发弟 刁小龙 赵春林 王芳 WANG Chuan;WU Run;LI Fa-di;DIAO Xiao-long;ZHAO Chun-lin;WANG Fang

作者机构：甘肃农业大学动物医学学院甘肃730070 甘肃农业大学动物科学技术学院甘肃730070 甘肃中医学院甘肃730070 

基　　金：教育部高等学校博士学科点专项科研基金项目(20060733006) 甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目(GNSW-2007-04) 家畜疫病病原生物学国家重点实验室基金项目(2008-2009) 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2011年第27卷第8期

页      码：708-711页

摘      要：目的为能够用实时荧光定量PCR研究消化系统PrP mRNA的表达水平,构建目的基因PrP的标准品质粒和标准曲线。方法根据GenBank中绵羊基因编码区保守序列,设计特异性引物和分子信标探针;提取总RNA,经反转录、RT-PCR后,提取质粒,PCR-SSCP及测序鉴定,获得ARQ质粒;将质粒梯度稀释,进行荧光定量PCR,获得标准曲线及回归方程。结果结果显示,本实验设计的分子信标具有特异性强、灵敏度高和结果准确的特性;标准曲线相关系数r2=0.999,表明线性关系好,成功构建了目的基因的标准品质粒和标准曲线。

主 题 词：PrP RT-PCR 实时荧光定量PCR 标准曲线 质粒 绵羊 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-2694.2011.08.008

馆 藏 号：203126567...