非洲猪瘟病毒D1133L蛋白增加宿主波形蛋白磷酸化而促进病毒在猪巨噬细胞中的复制

作     者：陈玲玲 张婷 郝雨 杨金柯 史喜绢 张大俊 杨行 赵登率 闫文倩 别鑫恬 陈国辉 郑海学 乐涛 张克山 CHEN Lingling;ZHANG Ting;HAO Yu;YANG Jinke;SHI Xijuan;ZHANG Dajun;YANG Xing;ZHAO Dengshuai;YAN Wenqian;BIE Xintian;CHEN Guohui;ZHENG Haixue;LE Tao;ZHANG Keshan

作者机构：重庆师范大学生命科学学院重庆401331 中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 

基　　金：国家重点研发计划(2021YFD1801300) 甘肃省科技重大专项计划(21ZD3NA001-5,20ZD7NA006) 甘肃省科技计划(21JR7R024) 动物用生物制品创制与应用(21ZD3NA001) 国家生猪产业体系(CARS-35) 国家生猪技术创新中心先导科技项目(NCTIP-XD/C03) “十四五”广东省农业科技创新十大主攻方向“揭榜挂帅”项目(2022SDZG02) 中国农业科学院科技创新工程(CAAS-ASTIP-2022-LVRI) 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2024年第64卷第3期

页      码：720-732页

摘      要：非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起家猪和野猪的一种高死亡率的传染性疾病。ASFV具有庞大的基因组,其中非结构蛋白pD1133L被预测为其编码的6个解旋酶之一。本实验室应用免疫沉淀-质谱联用(immunoprecipitation-mass spectrometry,IP-MASS)技术筛选与pD1133L互作的宿主细胞蛋白,发现细胞波形蛋白(vimentin,VIM)为pD1133L互作的宿主蛋白之一,但尚不清楚宿主蛋白VIM对ASFV复制的影响。【目的】探究ASFV与VIM的相互调控作用,揭示VIM促进ASFV复制的机制。【方法】通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)试验验证pD1133L与VIM存在互作关系;外源过表达VIM蛋白以及设计并合成VIM的si RNA探究VIM对ASFV复制的影响;利用Western blotting以及荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)方法检测ASFV对VIM蛋白水平以及转录水平的影响;通过Western blotting、间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)探究巨噬细胞感染ASFV后VIM磷酸化水平变化以及亚细胞定位变化情况;CCK-8试剂盒检测VIM磷酸化抑制剂KN-93处理的最佳浓度,并利用Western blotting以及IFA检测KN-93对VIM磷酸化、亚细胞定位以及对ASFV复制影响。【结果】VIM过表达促进ASFV复制,敲低VIM的表达则抑制ASFV复制;ASFV感染抑制VIM蛋白水平以及转录水平表达,且呈时间依赖性;ASFV感染后VIM发生磷酸化修饰且发生亚细胞定位改变,从而促进ASFV复制。【结论】证实了ASFV与宿主蛋白VIM之间的相互调控作用;初步确定ASFV感染后VIM受到ASFV pD1133L调控,亚细胞定位发生重排向核周聚集从而促进ASFV复制的机制。

主 题 词：非洲猪瘟病毒 D1133L蛋白 波形蛋白 蛋白互作 磷酸化 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.13343/j.cnki.wsxb.20230486

馆 藏 号：203126600...