水禽4种常见致病菌多重PCR方法的建立及应用

作     者：蒲龄 张亚楠 彭珊 杨茂生 徐景峨 PU Ling;ZHANG Ya’nan;PENG Shan;YANG Maosheng;XU Jing’e

作者机构：贵州省农业科学院畜牧兽医研究所贵阳550005 广东省现代农业装备研究所广州510000 佛山科学技术学院广东佛山528231 

基　　金：贵州省科技计划项目(黔科合支撑1Y042号,黔科合成果4212号,黔科合成果一般005) 贵州省农业科学院青年基金项目(黔农科院青年基金29号) 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2024年第5期

页      码：66-72页

摘      要：为建立一种能同时检测大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌的多重PCR方法,试验根据大肠杆菌phoA基因、鸭疫里默氏杆菌ompA基因、多杀性巴氏杆菌kmt 1基因、金黄色葡萄球菌FemB基因的保守区域设计4对特异性引物,通过优化退火温度和引物浓度建立多重PCR方法,检验该方法的特异性、敏感性性、重复性,应用该方法检测145份病死水禽临床样品,并与传统细菌分离鉴定方法进行比较。结果表明:优化后的最佳退火温度为52℃,引物浓度为10μmol/L。建立的多重PCR方法能特异性地扩增出靶基因,沙门氏菌、链球菌、产气荚膜梭菌等临床常见菌均未扩增出条带,对大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌4种细菌的检出下限是0.4 pg/mL,单一PCR扩增ompA、kmt 1、phoA和FemB基因的检出下限分别为4×10^(-3),0.4,4×10^(-3),4×10^(-6)pg/mL。多重PCR方法对临床样品的检测结果与传统细菌分离鉴定方法的符合率均在90%以上。说明试验建立的多重PCR方法具有结果稳定、重复性高的特点,适合水禽病原微生物流行病学调查。

主 题 词：多重PCR方法 大肠杆菌 鸭疫里默氏杆菌 多杀性巴氏杆菌 金黄色葡萄球菌 

学科分类：090601[090601] 0905[农学-林学类] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2023.01.0093

馆 藏 号：203126654...