山羊地方性鼻内肿瘤病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

作     者：李鹏飞 高桂琴 周广青 吴锦艳 颜新敏 曹小安 何继军 袁莉刚 尚佑军 LI Pengfei;GAO Guiqin;ZHOU Guangqing;WU Jinyan;YAN Xinmin;CAO Xiaoan;HE Jijun;YUAN Ligang;SHANG Youjun

作者机构：甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州730046 白银市农业综合行政执法队白银730900 

基　　金：国家现代农业产业技术体系项目(CARS-39-04B) 白银市2023年度高层次人才(团队)引进项目(BYTIP2023-10) 甘肃省科技特派团专项(22CX8NA012) 甘肃农业大学实践项目(GSAU-JSFW-2023-07) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2024年第55卷第5期

页      码：2259-2266页

摘      要：山羊地方性鼻内肿瘤(enzootic nasal tumor, ENT)是山羊的病毒性传染病,由山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus of goats, ENTV-2)所引起,感染后可以导致山羊的鼻道筛骨上皮细胞发生不可逆的癌变,已在世界范围内广泛存在,对山羊养殖业造成严重的经济损失。为建立快速、准确且能定量分析ENTV-2的检测方法,本研究根据GenBank上发布的ENTV-2 env基因(MT254061.1)保守区域设计引物和TaqMan探针,建立ENTV-2 TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性、重复性与临床检测效果进行验证。结果显示,重组质粒标准品模板浓度为6.30×10^(2)~6.30×10^(7) copies·μL^(-1)呈现良好的线性关系,相关系数R^(2)为0.996 5,扩增效率为110%,线性方程的斜率为-2.953,最低检测限度为6.30×10^(1) copies·μL^(-1);组内变异系数和组间变异系数均小于2%,重复性好;与口蹄疫病毒((foot-and-mouth disease virus, FMDV)、小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV)、蓝舌病毒(bluetongue virus)、羊内源性逆转录病毒(endogenous retroviruses)等均无交叉反应,表明该方法具有很好的特异性。利用本研究所建立的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法对29份临床样品进行检测,该方法较普通PCR方法的检出率更高。综上表明,本研究成功建立了ENTV-2 TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法,为ENTV-2的快速诊断和流行病学调查提供技术手段。

主 题 词：山羊地方性鼻内肿瘤病毒 羊内源性逆转录病毒 TaqMan 荧光定量RT-PCR 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2024.05.043

馆 藏 号：203126687...