牛传染性鼻气管炎病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

作     者：王倩颖 杨森 刘可欣 王超 孙飞雁 张淑琴 WANG Qianying;YANG Sen;LIU Kexin;WANG Chao;SUN Feiyan;ZHANG Shuqin

作者机构：中国农业科学院特产研究所长春130112 黑龙江省农业科学院黑龙江农业科技杂志社哈尔滨150086 

基　　金：吉林省重点研发项目(20220202058NC) 国家自然科学基金(31602093) 基本科研业务费(1610342018004) 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2023年第31卷第6期

页      码：140-145页

摘      要：为了建立牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的快速定量检测方法,本研究针对IBRV基因组gD序列保守区域设计特异性扩增引物,扩增的目的片段大小为105 bp,将其克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒标准品pMD-gD-IBRV,优化反应体系后,建立了快速检测IBRV的SYBR Green I荧光定量PCR方法。该方法特异性较强,与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法敏感性高,对重组质粒标准品的最低检出限达4.8×10^(0)copies/μL,高于常规PCR方法;批内、批间重复性试验的变异系数均小于2%,表明该方法重复性良好;该方法检测的样本阳性率高于常规PCR方法,利用该方法检测牛场送检的106份临床样品,结果显示IBRV的阳性率为36.7%,常规PCR检测方法检测显示阳性率为33.0%,二者符合率为96.2%,表明该方法更适用于临床样品检测。本研究建立的IBRV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、快速高效,对于IBRV的检测和流行病学调查具有重要意义。

主 题 词：牛传染性鼻气管炎病毒 检测方法 gD基因 实时荧光定量PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20211103.001

馆 藏 号：203126690...