基于CRISPR/Cas9技术PCSK9基因敲除小鼠模型的构建及表型验证

作     者：托罗娜依·米吉提 陈小翠 崔元峰 阿比旦·阿卜杜如苏力 陈邦党 马秀敏 Tuoluonayi Mijiti;CHEN Xiaocui;CUI Yuanfeng;Abidan Abudurusuli;CHEN Bangdang;MA Xiumin

作者机构：新疆医科大学附属肿瘤医院医学检验中心乌鲁木齐830000 新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830017 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院乌鲁木齐830011 

基　　金：新疆维吾尔自治区自然科学基金青年基金项目(2017D01C346) 

出 版 物：《新疆医科大学学报》 (Journal of Xinjiang Medical University)

年 卷 期：2024年第47卷第2期

页      码：186-191页

摘      要：目的基于CRISPR/Cas9技术构建前枯草杆菌蛋白原转换酶9(Preprotein convertase subtilisin/kexin type9,PCSK9)基因敲除小鼠模型并对其表型进行初步验证。方法利用非同源末端连接(NHEJ)修复引入突变的方式,针对PCSK9基因靶序列设计单链向导RNA(sgRNA),将sgRNA和Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6J小鼠受精卵,获得F0代敲除小鼠,通过繁育及基因型鉴定获得PCSK9基因敲除(PCSK9 KO)纯合子小鼠。采用PCR方法对PCSK9 KO小鼠进行基因鉴定,Western Blot检测肝组织PCSK9及低密度脂蛋白受体(LDL-R)蛋白的表达,同时检测心、脑、肾、脂肪组织中的PCSK9蛋白表达水平,q-PCR检测PCSK9的mRNA表达水平。采用酶法检测血清中总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平。结果PCR产物凝胶电泳以及PCSK9蛋白及mRNA表达结果表明成功获得全身性PCSK9基因敲除小鼠,肝组织LDL-R(3.42±0.56)蛋白表达显著增高。与WT组相比,PCSK9小鼠血清TC(90.75±17.81 mg/dL vs 54.19±2.42 mg/dL)、TG(81.26±11.98 mg/dL vs 50.92±11.93 mg/dL)显著降低(P<0.001)。结论基于CRISPR/Cas9技术成功构建获得PCSK9基因敲除小鼠,敲除PCSK9基因通过上调肝脏LDL-R蛋白显著降低血脂水平。

主 题 词：CRISPR/Cas9 PCSK9 基因敲除 基因型鉴定 血脂水平 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-5551.2024.02.006

馆 藏 号：203126708...