猪圆环病毒2型遗传标记毒株的构建及生物学特性鉴定

作     者：刘长明 危艳武 张超范 谭斌 陆月华 孔宪刚 LIU Chang-ming;WEI Yan-wu;ZHANG Chao-fan;TAN Bin;LU Yue-hua;KONG Xian-gang

作者机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 

基　　金：人事部高层次留学人才回国工作资助项目(2005) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2006年第28卷第6期

页      码：609-613页

摘      要：以临床分离的猪圆环病毒2型(PCV2)为材料,利用PCR法扩增病毒基因组,将2个基因组顺式连接插入到质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalⅠ限制性内切酶位点作为遗传标记,经重组质粒转染细胞获得带有遗传标记的新毒株。采用免疫过氧化物酶单层细胞试验、免疫电镜、核酸序列分析表明,在病毒感染细胞中检出病毒特异抗原,其抗原性、病毒形态学及基因序列与亲本毒株一致。鉴于新病毒基因组内插入一个SalⅠ酶切位点,用PCR与限制性片段长度多态性分析法可与野生型病毒相鉴别。新毒株经细胞连续传60代,体外培养增殖性能稳定,毒价可达10^(6．6)TCID_(50)/mL。取病毒培养物经静脉和滴鼻途径接种35日龄抗体阴性仔猪4头,接种后表现出体温升高、进行性消瘦、被毛粗糙及体表淋巴结肿胀症状,迫杀后多种脏器中均能检测到病毒抗原与核酸。研究表明,利用感染性分子克隆手段构建带有遗传标记的PCV2新毒株,为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、分子诊断等研究奠定了基础。

主 题 词：猪圆环病毒2型 遗传标记病毒 生物学特性 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.2006.06.001

馆 藏 号：203127025...