Let-7a表达质粒的构建及其对肺癌A549细胞k-Ras蛋白表达的抑制作用

作     者：何晓燕 陈俊霞 欧阳溪 张政 彭惠民 HE Xiao-yan;CHEN Jun-xia;OU-YANG Xi;ZHANG Zheng;PENG Hui-min

作者机构：重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 

基　　金：国家自然科学基金落选预研资助[重医大(2010)2号文件] 重庆医科大学校级重点科研课题(XBZD201001) 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2010年第30卷第11期

页      码：2427-2431页

摘      要：目的探讨let-7a介导的基因表达调控在肺癌形成中的作用。方法依据miRBase数据库中hsa-let-7a序列,设计两条寡核苷酸片段,退火处理后克隆至pGenesil-1质粒,构建重组质粒pGenesil-let-7a,同时设计并构建一个阴性对照质粒pGenesil-control。将pGenesil-let-7a及pGenesil-control转染肺癌A549细胞,经G418筛选,建立稳定表达let-7a-GFP及control-GFP的细胞株。采用MTT比色法检测活细胞数并绘制生长曲线;半定量RT-PCR、Western blotting及免疫细胞化学检测k-Ras表达的差异。结果经测序证实重组质粒构建成功,与未处理的A549细胞和稳定表达pGenesil-control的细胞相比,在稳定表达pGenesil-let-7a的A549细胞中,细胞生长明显减慢,k-Ras的蛋白表达明显降低,而k-Ras的mRNA水平无明显变化。结论 let-7a在翻译水平抑制了k-Ras的表达,并对细胞生长具有显著的抑制作用。

主 题 词：微RNA let-7a 肺癌 k-Ras 基因表达 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203127192...