野生型非洲猪瘟病毒多重数字PCR方法的建立

作     者：李松达 蒋亚君 庞忠宝 黄颖 翟文竹 朱鸿飞 赵晓民 贾红 LI Song-da;JIANG Ya-jun;PANG Zhong-bao;HUANG Ying;ZHAI Wen-zhu;ZHU Hong-fei;ZHAO Xiao-min;JIA Hong

作者机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 

基　　金：国家重点研发计划项目(2021YFD1801200) 云南省重点研发计划项目(202103AC100001) 中国农业技术支持专项(CARS36) 农业科技创新计划项目(ASTIP-IAS-11) 动物用相关生物制品联合开发项目(K4050722009) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2024年第45卷第4期

页      码：32-39页

摘      要：为建立一种鉴别诊断野生株和基因缺失株非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的方法,针对ASFV的B646L、EP402R、DP96R基因保守序列设计3套引物和探针,优化三重荧光定量PCR体系作为基础建立微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)检测方法,并对方法的特异性、灵敏性及重复性进行评估。结果显示,优化后的多重荧光定量PCR检测方法的标准曲线线性关系良好,对PRRSV、PEDV、PRV、VSV、PCV、RNase-free水、重组质粒标准品进行特异性检测,特异性良好;重复性试验结果显示,变异系数均小于2%;对3种重组质粒的最低检测下限均为102 copies/μL。参照上述多重荧光定量PCR方法优化后的条件,进行多重ddPCR检测方法的建立,并且对该方法进行评价。结果显示,ddPCR检测方法标准曲线的线性关系良好;特异性及重复性良好;最低检测下限B646L为11.6 copies/μL、EP402R为13.3 copies/μL、DP96R为16.9 copies/μL;ddPCR的检测灵敏度比荧光定量PCR有优势。使用建立的多重ddPCR方法对14份P3实验室中的样品进行实验室样品检测,样品检测符合率达到100%。成功建立了能够同时检测用于鉴别野毒株感染与疫苗株的荧光定量PCR和微滴式ddPCR方法。

主 题 词：非洲猪瘟病毒 多重荧光定量PCR 微滴式数字PCR 

学科分类：090603[090603] 090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2024.04.006

馆 藏 号：203127328...