小鼠CDC26基因短发夹RNA重组腺病毒载体的构建与表达分析

作     者：程然然 闫永红 弓蒙蒙 曹培丽 贺福初 王晓晖 CHENG Ran-Ran;YAN Yong-Hong;GONG Meng-Meng;CAO Pei-Li;HE Fu-Chu;WANG Xiao-Hui

作者机构：北京工业大学生命科学与生物工程学院北京100124 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京102206 

基　　金：国家自然科学基金(81171920) 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2014年第25卷第5期

页      码：656-659页

摘      要：目的:构建靶向CDC26基因的短发夹RNA(shRNA)重组腺病毒载体,干扰小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中CDC26的表达。方法:设计小鼠靶向CDC26基因的shRNA,插入穿梭质粒pENTRY-EF1a-EGFP-Mir30,通过Gateway系统获得重组腺病毒载体pAd-CDC26-shRNA;线性化后转染HEK293A细胞,进行病毒包装;用包装的重组腺病毒感染MEF,24 h后收集细胞,提取总RNA,逆转录后用荧光定量PCR法检测MEF内CDC26 mRNA的变化,以检测所设计shRNA的敲低效率。结果:构建的重组腺病毒载体pAd-CDC26-shRNA经酶切鉴定后正确;转染HEK293A细胞后8 d,观察到细胞病变及GFP的大量表达,表明重组腺病毒包装成功;感染MEF后,实时荧光定量PCR检测表明,细胞内CDC26 mRNA的水平较对照组敲低了73.14%,腺病毒注射7 d后,注射CDC26 shRNA的小鼠血糖较对照组明显降低。结论:构建了具有较高敲低效果的小鼠CDC26基因shRNA重组腺病毒,并且具有体内活性。

主 题 词：CDC26 短发夹RNA 腺病毒 血糖 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2014.05.013

馆 藏 号：203127374...