表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒的构建及鉴定

作     者：邵云亭 楼张蓉 符军 李山虎 黄芳 王芃 吴成君 Shao Yunting;Lou Zhangrong;Fu Jun;Li Shanhu;Huang Fang;Wang Peng;Wu Chengjun

作者机构：大连理工大学医学部基础医学院116024 山东大学微生物技术国家重点实验室济南250100 军事医学研究院生物工程研究所北京100850 

出 版 物：《国际病毒学杂志》 (International Journal of Virology)

年 卷 期：2024年第31卷第1期

页      码：22-27页

摘      要：目的构建表达HPV16E7基因的重组腺病毒质粒.方法设计携带酶切位点和无酶切位点的两对引物以扩增ccdBKan目的片段.分别将ccdBKan与质粒pBR322-Ad4-eGFP共转至电转感受态GB08red-gyr462构建两种表达ccdBKan基因的重组Ad4质粒.利用ccdB正反筛选系统与ExoCET/Red重组结合将HPV16E7基因插入Ad4的E1A区,构建表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒pBR322-Ad4-E 1 Amut-C16E7P,经酶切、测序验证.提取质粒pBR322-Ad4-EIAmut-C 16E7P释放基因组,转染293T细胞以包装和扩增病毒,用病毒感染293T细胞,检测HPV16E7基因在细胞内的转录水平和蛋白表达.重组病毒经肌肉接种BALB/C裸鼠,收集小鼠血清用于病毒中和实验.结果成功构建表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒,并在293T细胞中成功包装出重组病毒.qRT-PCR和Western blotting验证了重组病毒HPV16 E7基因的成功表达,病毒中和实验结果提示经重组病毒免疫后的小鼠血清能够中和Ad4-HPV16E7.结论成功构建了表达HPV16E7基因的重组腺病毒株,为进一步研究HPV16 E7在癌症发病机制中的作用以及HPV感染相关癌症的治疗方法提供新的思路和依据,并且可能为HPV治疗性疫苗的研究探索提供了一种潜在策略.

主 题 词：HPV16 E7基因 腺病毒 重组病毒 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1673-4092.2024.01.005

馆 藏 号：203127382...