猪繁殖与呼吸综合征病毒2型TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法的建立
作者机构：扬州大学医学院(转化医学研究院)江苏扬州215001 中牧实业股份有限公司北京100070 江苏科技大学生物技术学院江苏镇江212018 江苏农林职业技术学院江苏句容212400
基 金：江苏省基础研究计划(自然科学基金)青年基金项目(BK20201005) 江苏农林职业技术学院校企合作项目(2020kj021)
出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)
年 卷 期：2024年第56卷第4期
页 码：84-88页
摘 要：为了准确、特异、高效地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒2型(PRRSV2),本研究根据GenBank上登录的PRRSV2不同谱系流行毒株的ORF6基因序列,选取保守区域设计合成了1对特异性检测引物和1条MGB探针,经优化退火温度、引物和探针比例等反应条件及敏感性、特异性、重复性试验,建立了检测PRRSV2的TaqMan MGB荧光定量PCR方法。结果:以猪繁殖与呼吸综合征病毒1型(PRRSV1)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)及猪细小病毒(PPV)等阳性核酸为模板,均无扩增;对标准质粒的最低检测下限为1×10^(1)copies/μL,建立的标准曲线呈现良好的线性关系,相关系数R2为0.994;稳定性和重复性好,批内和批间变异系数均小于1.78%。应用该方法对保留的30份临床阳性样品进行检测,结果阳性100%,Ct值在22~36间。综上,本研究建立的TaqMan MGB荧光定量PCR方法可用于临床和实验室中PRRSV2的快速检测,为猪繁殖与呼吸综合征的防控提供了技术支持。
主 题 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF6基因 TaqMan MGB qPCR
学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类]
馆 藏 号：203127418...
