血清4型禽腺病毒Fiber-1蛋白截短表达及多克隆抗体制备

作     者：罗昕雨 赵磊 陈玉晴 缪欣怡 石家鑫 顾有方 李文超 刘欣超 LUO Xinyu;ZHAO Lei;CHEN Yuqing;MIAO Xinyi;SHI Jiaxin;GU Youfang;LI Wenchao;LIU Xinchao

作者机构：安徽科技学院动物科学学院安徽凤阳233100 动物营养调控与健康安徽省重点实验室安徽凤阳233100 

基　　金：农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室开放课题(YDWS202104) 安徽省高校自然科学研究项目(2022AH051641) 安徽省自然科学基金(1908085QC116) 安徽科技学院人才引进项目(DKYJ201902) 

出 版 物：《安徽科技学院学报》 (Journal of Anhui Science and Technology University)

年 卷 期：2024年第38卷第2期

页      码：25-30页

摘      要：目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,截取具有较高免疫原性的片段,设计合成特异性引物,以CH/AHMC/2015分离株基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得截短Fiber-1(sFiber-1)基因片段,将其连接至原核表达载体pET-32a,验证后转化至大肠杆菌BL21感受态中,诱导表达sFiber-1蛋白。纯化后的蛋白与佐剂乳化后免疫SD大鼠,制备多克隆抗体,并测定多克隆抗体效价。用Western-blot检测抗体免疫原性。结果:成功构建了sFiber-1的原核表达载体,获得FAdV-4的sFiber-1重组蛋白,经SDS-PAGE鉴定,重组sFiber-1蛋白大小约为52 kDa,主要以包涵体形式表达;间接ELISA法测得sFiber-1多克隆抗体效价为1∶2^(13);Western blot结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别出重组sFiber-1蛋白。结论:本研究成功表达了FAdV-4的重组sFiber-1蛋白,制备了具有较高免疫活性的sFiber-1多克隆抗体,可为FAdV-4的检测及诊断奠定基础。

主 题 词：血清4型禽腺病毒 Fiber-1基因 重组蛋白 多克隆抗体 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.19608/j.cnki.1673-8772.2024.0204

馆 藏 号：203127420...