抗菌肽-裂解酶融合抗铜绿假单胞菌蛋白的可溶表达与活性评价

作     者：周俊秀 姚欣 郑永祥 余蓉 ZHOU Junxiu;YAO Xin;ZHENG Yongxiang;YU Rong

作者机构：四川大学华西药学院四川成都610041 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(批准号:81973226) 四川省自然科学基金面上项目(2023NSFSC0559) 

出 版 物：《华西药学杂志》 (West China Journal of Pharmaceutical Sciences)

年 卷 期：2024年第39卷第2期

页      码：142-145页

摘      要：目的通过与促溶蛋白融合表达,分离、纯化获得抗菌融合蛋白,并初步评价其抗菌活性。方法将绵羊骨髓细胞抗菌肽SMAP29的N端与源自噬菌体JD010裂解酶LysPA26的C端融合设计新的抗菌蛋白(AL)。通过同源重组构建pCold-His-TF-AL表达质粒。通过Ni-亲和层析和阴离子交换层析分离纯化AL,采用平板计数法初步评价AL的抗铜绿假单胞菌活性。结果在*** BL21(DE3)中,质粒pCold-His-TF-AL能明显表达出抗菌蛋白AL,并且90%以上的AL为可溶形式分布于***破菌液的上清液中。可分离纯化得到纯度超95%的AL。0.05 mg·mL^(-1) AL在30 min内可将铜绿假单胞菌PAO1菌量降低5.55个对数单位,具较高的抗菌活性。结论通过采用Trigger Factor标签融合表达和冷休克诱导方法可实现AL的高效可溶表达,纯化的AL对铜绿假单胞菌具有明显的抗菌活性。

主 题 词：绵羊骨髓细胞抗菌肽 SMAP29 裂解酶 LysPA26 重组蛋白 TF标签 可溶表达 铜绿假单胞菌 

学科分类：1007[医学-药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.13375/j.cnki.wcjps.2024.02.005

馆 藏 号：203127424...