结核分枝杆菌Rv3048c基因及编码蛋白生物信息学分析与制备

作     者：徐锐强 马瑛龙 邱蕾 王佩 马国荣 XU Ruiqiang;MA Yinglong;QIU Lei;WANG Pei;MA Gurong

作者机构：宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 宁夏回族自治区第四人民医院 

基　　金：宁夏自然科学基金项目(No.2023A1059) 宁夏回族自治区重点研发(一般项目)(No.2019BEG03065) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2024年第19卷第4期

页      码：382-388,394页

摘      要：目的探究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)Rv3048c基因编码蛋白成为结核病临床检测标志物及蛋白疫苗的可能性,为结核病防控提供新的实验数据。方法通过生物信息学方法分析、预测该基因及其编码蛋白的基本生物学性质;在NCBI数据库检索Rv3048c基因及编码蛋白序列,设计并合成Rv3048c基因的引物,以热灭活Mtb基因组DNA为模板,经聚合酶链式反应获得该基因并将其构建到pET28a表达载体,构建pET28a-Rv3048c重组质粒;应用热激法将其转化至*** BL21(DE3)感受态细胞,构建pET28a-Rv3048c-BL21(DE3)表达菌株;以IPTG为诱导剂获得Rv3048c基因编码的重组蛋白;最后,用镍金属螯合层析纯化获得高纯度重组蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot验证该重组蛋白。结果Rv3048c基因编码蛋白NrdF2由324个氨基酸组成,含两个α亚基和两个β亚基。该蛋白是亲水性、无跨膜结构域、无信号肽的细胞内蛋白;该蛋白理论分子质量为36.99153 ku,等电点为4.57,有36个磷酸化位点。基于ABCpred预测出5个B细胞表位。SYFPEITHI预测出CTL细胞表位和Th细胞表位共有9个。重组质粒Pet28a-Rv3048c在表达宿主*** BL21(DE3)中为可溶性表达;SDS-PAGE和小鼠抗His-Tag抗体免疫印迹(Western blot,WB)证实重组质粒pET28a-Rv3048c在*** BL21(DE3)中成功表达。结论Rv3048c基因编码蛋白nrdF2中存在多个位点和抗原表位,是潜在的结核病检测血清标志物。本研究获得该重组蛋白,为进一步评估其免疫原性与结核病血清学检测提供实验支持。

主 题 词：结核分枝杆菌 Rv3048c 结核病 血清标志 生物信息学 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13350/j.cjpb.240403

馆 藏 号：203127447...