检测人TCR BD基因重排时RSS断裂末端的LM-PCR方法的建立

作     者：姚新生 马骊 温茜 邹红云 阮光平 杨介钻 王小宁 YAO Xin-Sheng;MA Li;WEN Qian;ZOU Hong-Yun;RUAN Guang-Ping;YANG Jie-Zuan;WANG Xiao-Ning

作者机构：南方医科大学-原第一军医大学生物技术学院分子免疫学研究所广州510515 华南理工大学生物科学与工程学院广州510641 

基　　金：国家重点基础研究发展规划基金资助(973子课题项目:2001CB510008) 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2006年第22卷第4期

页      码：342-345页

摘      要：目的:建立检测人T细胞TCRBD基因(Diversity Gene)经历重排的连接介导PCR方法(Ligation Mediate dPCR,LMPCR),为T细胞重排和疾病的关系研究提供基础。方法:在人TCRβ链BD1与BD25′端重组信号序列(RSS)前,BD1与BD23′端RSS后各设计两套用于巢式PCR引物;设计并合成和双链RSS平断裂末端相接的特殊接头(BWLinker),提取胸腺组织、正常人和急性T淋巴细胞白血病(TALL)外周血单个核细胞(PBMC)样本总DNA,和BWlinker连接,进行巢式PCR,PCR产物琼脂糖电泳分析,阳性产物做胶回收,并克隆测序鉴定。结果:在1例胸腺组织提取的总DNA中证实存在BD1和BD25′和3′的RSS断裂末端,在2例TALLs的PBMC中检测到BD25′和3′的RSS断裂末端,2例正常人PBMC中未能检测到RSS断裂末端,阳性的LMPCR产物通过测序鉴定,和基因组中序列完全相符合。结论:1例胸腺组织和2例TALL的PBMC中检测到RSS断裂末端,提示TCRBD基因正经历重排,测序结果表明建立的监测TCR重排的LMPCR方法可靠,可用于T细胞重排模型和相关疾病的机制研究。

主 题 词：连接介导PCR(LM-PCR) 胸腺 基因重排 重组信号序列(RSS) 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203127477...