呼吸道合胞病毒mRNA候选疫苗的表达、鉴定及免疫效果验证

作     者：姜人月 庄忻雨 田明尧 唐家凤 狄亚心 杨松惠 许智强 于潼 张桐 金鑫 金宁一 JIANG Renyue;ZHUANG Xinyu;TIAN Mingyao;TANG Jiafeng;DI Yaxin;YANG Songhui;XU Zhiqiang;YU Tong;ZHANG Tong;JIN Xin;JIN Ningyi

作者机构：延边大学农学院吉林延吉133002 中国农业科学院长春兽医研究所 广西大学动物科学技术学院 东北农业大学动物医学学院 吉林农业大学动物医学学院 吉林大学动物医学学院 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金项目(No.32202820) 国家重点研发计划项目(No.21ZGY30) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2024年第19卷第5期

页      码：497-501页

摘      要：目的制备呼吸道合胞病毒F蛋白的融合前构象(pre-F)mRNA疫苗,进行可行性验证。方法对抗原基因进行密码子优化设计,分别连接至pGEM-3Zf-N3载体上,通过质粒线性化、体外转录、纯化和Cap1加帽处理,得到功能性mRNAs。在转染至293T细胞后,利用Western blot和间接免疫荧光试(IFA)来确定目标蛋白的表达情况。通过微流控装置制备LNP/mRNAs疫苗免疫C57BL/6小鼠,检测小鼠血清中抗原特异性IgG抗体效价,评估免疫效果。结果成功构建重组质粒Pre-F-GCN4t和mDS-Cav1,通过双酶切验证条带符合预期大小。表达目的抗原大小为57.57 ku和64.35 ku。成功检测小鼠血清中抗原特异性IgG抗体,Pre-F-GCN4t免疫组的效果优于mDS-Cav1组,3次免疫较2次免疫提升了2倍,抗体效价最高可达1∶4×10^(4)。结论两种抗原设计模式均具有可行性,Pre-F-GCN4t的设计方式对于激活机体的体液免疫应答更有优势,mRNA疫苗无需体内转录,为呼吸道合胞病毒mRNA疫苗的优化设计提供理论基础。

主 题 词：呼吸道合胞病毒 mRNA疫苗 密码子优化 体液免疫 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13350/j.cjpb.240501

馆 藏 号：203127590...