土壤固碳微生物的绝对定量检测实验设计

作     者：付小花 陈皓 张华 周磊 唐贤春 FU Xiaohua;CHEN Hao;ZHANG Hua;ZHOU Lei;TANG Xianchun

作者机构：同济大学环境科学与工程学院上海200092 同济大学污染控制与资源化研究国家重点实验室上海200092 

基　　金：同济大学第十七期实验教学改革项目(0400104179) 

出 版 物：《实验室研究与探索》 (Research and Exploration In Laboratory)

年 卷 期：2024年第43卷第4期

页      码：18-22页

摘      要：为了定量检测土壤中的固碳微生物,设计以功能基因cbbL为靶标的固碳微生物微滴数字聚合酶链式反应(ddPCR)检测方法。选择合适的引物探针,从退火温度、探针浓度以及引物浓度进行反应条件的优化,分析ddPCR检测方法的线性范围、敏感性、重复性和特异性。结果显示,当退火温度为55.8℃、探针与引物浓度分别为350、750 nmol/L时,建立的cbbL-ddPCR扩增反应效率最高,阴阳性微滴分布界限最明显,平均拷贝数较高;检测的线性范围为2.3×10^(0)~2.3×10^(5)copies/μL-DNA,曲线方程y=0.1077x-95.562,相关系数R^(2)为0.9997,检出限为0.5 copy/μL-DNA,21个重复的变异系数仅为3.92%,与其他4种非固碳微生物DNA未发生交叉反应。所建立的cbbL-ddPCR方法可用于土壤微生物固碳潜能测定。

主 题 词：微滴数字聚合酶链式反应 固碳微生物 cbbL基因 反应条件优化 

学科分类：0401[教育学-教育学类] 082803[082803] 04[教育学] 08[工学] 0828[工学-建筑类] 0804[工学-材料学] 040102[040102] 

D　O　I：10.19927/j.cnki.syyt.2024.04.005

馆 藏 号：203127733...