基于CRISPR/Cas13a的马尔堡病毒核酸检测方法的建立

作     者：闫阔诚 李浩 白萱洋 韩尧 石大伟 贾雷立 孙岩松 YAN Kuocheng;LI Hao;BAI Xuanyang;HAN Yao;SHI Dawei;JIA Leili;SUN Yansong

作者机构：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院北京100071 中国人民解放军疾病预防控制中心北京100071 中国食品药品检定研究院传染病诊断试剂二室北京100050 

基　　金：国家重点研发计划(2023YFC2605100 2021YFC2301100) 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2024年第64卷第8期

页      码：3073-3085页

摘      要：【目的】建立一种基于成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白13a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated protein 13a,CRISPR/Cas13a),针对马尔堡病毒核酸的快速检测方法。【方法】根据马尔堡病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)基因保守区序列设计合成特异性的逆转录酶重组酶介导链替换核酸扩增(reverse transcription recombinase aided amplification,RT-RAA)引物及CRISPR RNA(crRNA),利用RT-RAA等温扩增技术对靶序列进行扩增,通过CRISPR/Cas13a系统检测扩增产物,并结合消线法(easy-readout and sensitive enhanced,ERASE)侧流层析试纸进行结果判读。最后利用国家标准品对建立的新方法的灵敏度和特异性进行评估。【结果】筛选出一组针对马尔堡病毒NP基因的高效扩增引物和crRNA,建立了用于马尔堡病毒检测的CRISPR-ERASE方法,可在1 h内检测出浓度为1 copy/μL目标核酸,并与其他多种病原体无交叉反应。【结论】本研究基于CRISPR/Cas13a建立了一种快速、简便、高灵敏度和高特异性的马尔堡病毒核酸检测方法。

主 题 词：马尔堡病毒 CRISPR/Cas13a 核酸检测 逆转录酶重组酶介导链替换核酸扩增(RT-RAA) 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13343/j.cnki.wsxb.20240076

馆 藏 号：203127801...