NoV P颗粒嵌合PEDV S1 基因多表位抗原的制备

作     者：章程 罗沛 周德荣 付新亮 阳佑天 黄运茂 刘文俊 ZHANG Cheng;LUO Pei;ZHOU Derong;FU Xinliang;YANG Youtian;HUANG Yunmao;LIU Wenjun

作者机构：仲恺农业工程学院动物科技学院广东广州510225 广东省水禽健康养殖重点实验室广东广州510225 佛山科学技术学院医药工程学院广东佛山528225 

基　　金：广州市科技计划项目(201804010412) 广东省自然科学基金区域联合基金青年基金项目(2020A1515110451) 

出 版 物：《仲恺农业工程学院学报》 (Journal of Zhongkai University of Agriculture and Engineering)

年 卷 期：2024年第37卷第2期

页      码：12-18页

摘      要：为制备诺如病毒(Norovirus,NoV)P颗粒嵌合猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)S1基因多表位的抗原.本研究通过设计合成PEDV S1多表位基因序列,酶切后连接到诺如病毒P基因重组pGEX-4T-1载体,将载体转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞后,提取质粒进行双酶切验证和测序.将测序正确的重组质粒转化至BL21表达菌体,使用不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)在不同诱导时间下进行原核表达,确定最佳诱导条件,并对重组蛋白进行可溶性分析.使用鼠源谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione-S-transferase,GST)单抗和PEDV阳性血清通过蛋白免疫印迹试验检测纯化后的重组蛋白.重组质粒NoV P-partical-PEDV-SE经双酶切鉴定获得大小约510 bp的目的基因条带,进一步测序结果证明重组质粒构建成功.诱导表达的重组蛋白分子质量约为79 ku,与预期大小一致.使用1.0 mmol/L IPTG在37℃条件下培养2 h作为最佳诱导条件,对超声破碎后的菌体进行检测,试验结果显示重组蛋白可在上清液中表达.鼠源GST单抗与PEDV阳性血清均能特异性地识别纯化后的重组蛋白,表明该重组蛋白具有良好的反应原性.本研究通过对NoV P-partical-PEDV-SE蛋白原核表达及纯化,成功获得大量纯度较高的重组蛋白,为进一步制备猪流行性腹泻多表位口服疫苗,实现对PEDV的有效预防奠定基础.

主 题 词：诺如病毒P颗粒 猪流行性腹泻病毒 蛋白免疫原性 疫苗 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-5663.2024.02.003

馆 藏 号：203127872...