利用原核表达系统制备家蚕非典型嗅觉受体Orco抗原蛋白

作     者：尹淑艳 杨春红 刘朝阳 于奇 高绘菊 崔为正 刘庆信 YIN Shu-Yan;YANG Chun-Hong;LIU Zhao-Yang;YU Qi;GAO Hui-Ju;CUI Wei-Zheng;LIU Qing-Xin

作者机构：山东农业大学植物保护学院山东泰安271018 山东农业大学林学院山东泰安271018 

基　　金：国家重点基础研究发展计划("973"计划)项目(2012CB114603) 山东科技发展计划项目(2014GNC110001) 现代农业产业技术体系建设专项基金项目(CARS-22-ZJ0302) 山东农业大学博士后基金项目(76364) 山东省现代农业产业技术体系蚕桑产业创新团队建设项目(31892) 

出 版 物：《昆虫学报》 (Acta Entomologica Sinica)

年 卷 期：2015年第58卷第11期

页      码：1194-1200页

摘      要：【目的】探索建立一种有效制备昆虫非典型嗅觉受体Orco抗原的方法,为Orco蛋白组织定位及功能研究奠定基础。【方法】设计带有Bam H I和Hind III酶切位点的引物,采用RT-PCR方法扩增家蚕Bombyx mori Orco第4-5跨膜区之间的基因片段,将其与原核表达载体p ET-28a(+)双酶切处理后进行连接,然后转化大肠杆菌Escherichia coli感受态细胞DH5α,重组质粒再转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,用SDS-PAGE检测诱导蛋白,用His Trap HP亲和层析对诱导表达的大量蛋白进行纯化。【结果】在大肠杆菌原核表达系统中,用IPTG诱导获得了与预测蛋白大小相符的目的蛋白,经SDS-PAGE检测发现目的蛋白以包涵体形式表达,在变性条件下经His Trap HP亲和层析获得大量可用于抗体制备的纯化蛋白。【结论】利用原核表达系统可获得制备家蚕Orco抗体的抗原蛋白。

主 题 词：家蚕 原核表达 非典型嗅觉受体 Orco 抗原蛋白 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 

核心收录：

D　O　I：10.16380/j.kcxb.2015.11.006

馆 藏 号：203127921...