犬猫弓形虫病real-time荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作     者：施远国 胡潇予 柯艳坤 李颖鑫 文青元 杨子鹏 杨留禄 袁子国 SHI Yuanguo;HU Xiaoyu;KE Yankun;LI Yingxin;WEN Qingyuan;YANG Zipeng;YANG Liulu;YUAN Ziguo

作者机构：深圳市动物疫病预防控制中心广东深圳518000 华南农业大学兽医学院广东广州510642 

基　　金：弓形虫检测技术研究项目(NJ-FW-20230068) 国家自然科学基金项目(31972707) 广东省基础与应用基础研究基金项目(2023A1515011795) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2024年第54卷第5期

页      码：602-608页

摘      要：为建立一种灵敏性高、特异性强、可自动化检测犬猫弓形虫的分子学诊断方法,本研究提取弓形虫RH虫株DNA,以致密颗粒蛋白7(GRA7)基因保守区为靶标,设计特异性引物并构建标准质粒pMD18-GRA7,以标准质粒pMD18-GRA7作为模板,建立SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR(real-time PCRor qPCR)检测方法。结果显示,该方法特异性引物只能扩增出弓形虫DNA样品,对阴性样品及其他犬猫寄生虫阳性样品DNA则未见扩增曲线。所建qPCR方法的检测下限为3 copies,当标准品浓度为3 copies/μL时,检测Ct值为29.4。对犬猫临床样品进行检测,并与商品化试剂盒结果相比校,阴阳性符合率达100%。上述结果表明,本研究建立的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法特异性好,敏感性强,结果稳定,可用于犬猫弓形虫病的临床检测。

主 题 词：弓形虫 犬 猫 GRA7 实时荧光定量PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2024.0095

馆 藏 号：203127955...