Red/ET同源重组介导的基因克隆载体pBACS的构建、鉴定与应用

作     者：侯少阳 李岚芳 杜丽霞 孙林慧 李典 禚惠荣 姜莉莉 张大虎 HOU Shaoyang;LI Lanfang;DU Lixia;SUN Linhui;LI Dian;ZHUO Huirong;JIANG Lili;ZHANG Dahu

作者机构：菏泽学院药学院山东菏泽274000 山东大树达孚特膳食品有限公司研发中心山东菏泽274000 

基　　金：山东省自然科学基金资助项目(ZR2022QB146) 菏泽学院博士基金资助项目(XY21BS35) 

出 版 物：《沈阳药科大学学报》 (Journal of Shenyang Pharmaceutical University)

年 卷 期：2024年第41卷第5期

页      码：590-597页

摘      要：目的通过Red/ET同源重组技术构建pBACS基因克隆及测序质粒载体。方法以质粒pBAC2015、pET28a为模板设计四对引物,PCR扩增得到四段彼此间有50 bp同源区域的基因片段,分别命名为bac-sop、bac-ori、bac-kan和bac-T7。利用Red/ET同源重组技术,将四段基因片段电转至*** GB05-dir感受态中进行线线重组。经酶切、测序验证阳性克隆质粒。此外,对重组质粒pBACS进行稳定性鉴定;利用pBACS分别进行细菌16S rDNA和真菌ITS基因克隆和基因测序。结果酶切和测序的验证结果显示,质粒的大小、元件方向及序列正确;pBACS具有较强的稳定性,适用于作为基因工程的克隆载体;可高效用于细菌16S rDNA和真菌ITS序列的克隆,阳性率为100%。结论成功利用Red/ET技术构建克隆载体pBACS,质粒载体具有稳定性强、重组效率高的特点,在基因克隆和基因测序等方面具有良好的应用潜力。

主 题 词：pBACS 克隆 Red/ET技术 同源重组 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2022.0706

馆 藏 号：203127957...