人组织因子基因RNAi载体pENTR^TM/U6-TF-shRNA的构建与鉴定

作     者：唐雯 庄思齐 杨红玲 熊石龙 孙学刚 封志纯 Tang Wen;Zhuang Si-qi;Yang Hong-ling;Xiong Shi-long;Sun Xue-gang;Feng Zhi-chun

作者机构：北京八一儿童医院 中山大学附属第一医院儿科广东省广州市510080 中山大学附属第一医院儿科 南方医科大学南方医院检验医学中心 南方医科大学中医药学院中医症候实验室 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2008年第12卷第2期

页      码：258-261页

摘      要：目的:RNAi效应与基因转移有密切关系。拟通过构建组织因子基因RNAi载体,为达到阻止凝血过程的启动打下基础。方法:实验于2006-11/2007-05在南方医科大学中医药学院中医症候实验室完成。利用Invitrogen公司在线软件设计人组织因子基因(NM_001993)干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成的寡核苷酸双链克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,连接产物转化到感受态细胞,增菌,质粒感受态扩增,质粒DNA小提、测序。结果:合成的寡核苷酸双链退火处理后,经4%琼脂糖凝胶电泳,紫外观察可见ds oligo和ss oligo清晰可见,双链寡核苷酸与pENTRTM/U6的连接反应,转化到质粒感受态扩增后,提取得到的质粒DNA经过测序结果证实pENTRTM/U6-TF-shRNA为阳性克隆。结论:成功构建出凝血途径的人组织因子基因pENTRTM/U6-TF-shRNA载体,为研究组织因子基因RNAi载体在出凝血疾病中的应用提供了稳定的转染细胞工具。

主 题 词：组织因子 RNAi载体 凝血 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 0403[0403] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 1010[医学-医学技术类] 071007[071007] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 

D　O　I：10.3321/j.issn:1673-8225.2008.02.015

馆 藏 号：203128027...