RyR2-shRNA重组慢病毒载体的构建及其对离体心肌细胞RyR2基因表达的影响

作     者：王前 段萍 朱涵 穆永慧 赵伟达 王志举 章茜 WANG Qian;DUAN Ping;ZHU Han;MU Yonghui;ZHAO Weida;WANG Zhiju;ZHANG Qian

作者机构：郑州大学基础医学院生理学教研室河南郑州450001 河南大学生命科学院生物工程系河南开封475001 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(项目编号30870909) 

出 版 物：《临床医学工程》 (Clinical Medicine & Engineering)

年 卷 期：2012年第19卷第9期

页      码：1454-1456页

摘      要：目的构建携带RyR2-shRNA的慢病毒载体,并检测其对小鼠离体心肌细胞中RyR2的基因沉默效果。方法设计并合成针对小鼠RyR2基因的shDNA,克隆入含U6启动子和EGFP报告基因的慢病毒载体psiHIV-U6-eGFP,构建表达RyR2-shRNA的慢病毒载体,通过将慢病毒转移质粒和包装质粒共转染293T细胞,得到重组慢病毒载体颗粒,然后离体感染小鼠心肌细胞,采用Real-timePCR检测RyR2在mRNA水平的沉默效应。结果经测序证实RNAi慢病毒载体构建成功并成功包装。流式细胞仪测得重组慢病毒感染小鼠心肌细胞的阳性率达80%以上。Real-timePCR证实,重组慢病毒Lenti-siRyR2感染的小鼠心肌细胞中RyR2在mRNA水平基因抑制率达90%以上。结论成功构建了表达RyR2-shRNA的重组慢病毒表达载体,并在小鼠心肌细胞中实现有效的基因沉默效应。

主 题 词：慢病毒载体 RyR2 RNA干扰 新生小鼠 

学科分类：10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-4659.2012.09.1454

馆 藏 号：203128052...