副结核分支杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作     者：平宇明 张宏莉 班亚星 刘建奇 任希恩 邬彩丽 刘东霞 徐丽媛 杨雪娇 常华 李劼 PING Yu-ming;ZHANG Hong-li;BAN Ya-xing;LIU Jian-qi;REN Xi-en;WU Cai-li;LIU Dong-xia;XU Li-yuan;YANG Xue-jiao;CHANG Hua;LI Jie

作者机构：云南农业大学动物医学院云南昆明650201 金宇保灵生物药品有限公司/兽用疫苗国家工程实验室内蒙古呼和浩特010020 河南省卫辉市农业农村局河南新乡453100 

基　　金：呼和浩特市科技创新领域人才项目(2022RC-联合体-1) 云南省基础研究面上项目(202001AT070119) 2023年生物医药领域科技计划项目“抗畜禽腹泻兽药创制”子项目(K2420230005) 云南省农业基础研究联合专项面上项目(2018FG001-043) 云南农业大学兽医公共卫生省创新团队项目(202105AE160014) 云南省石林县奶山羊产业科技特派团项目(202104BI090017) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2024年第45卷第7期

页      码：1-6页

摘      要：为加强副结核分支杆菌(MAP)的检测、监测与防控,建立MAP荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据国内MAP流行菌株特异性插入序列IS900设计1对特异性引物和探针,构建重组阳性质粒用作建立qPCR的模板,优化反应体系和条件,验证该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该方法最低检测限为5拷贝/μL;重复试验中批内和批间变异系数均小于4%;与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛支原体、肺炎克雷伯菌和曼氏杆菌等病原检测无交叉反应,能特异性检出MAP。应用建立的qPCR开展了内蒙古自治区6个市的MAP临床样品检测和流行情况分析,结果显示MAP平均阳性率为0.85%(6/704)。结果表明,成功建立了MAP的实时荧光定量PCR检测方法,可用于临床中MAP的监测和调查,为MAP疾病诊断与监控提供了快捷的方法。

主 题 词：副结核分支杆菌 实时荧光定量PCR 检测方法 感染调查 

学科分类：090603[090603] 090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2024.07.001

馆 藏 号：203128081...