人5-脂氧合酶重组蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备

作     者：王晓玲 郭明飞 史铁伟 高丽枫 王文涛 WANG Xiaoling;GUO Mingfei;SHI Tiewei

作者机构：赤峰学院基础医学院病原生物学与免疫学教研室内蒙古自治区赤峰市024000 

基　　金：内蒙古自治区自然科学基金(2020BS08005) 

出 版 物：《医学理论与实践》 (The Journal of Medical Theory and Practice)

年 卷 期：2024年第37卷第11期

页      码：1805-1807,1817页

摘      要：目的:原核表达并纯化人5-脂氧合酶(5LO)△112蛋白,将其免疫新西兰大白兔制备5-LO多克隆抗体。方法:使用DNAMAN设计重组引物,PCR扩增N端缺失112个氨基酸的5-LO截短DNA片段,将其重组到KpnⅠ和EcoRⅠ酶切的pET30a(+)质粒中,重组质粒pET30a-5LO△112转化大肠杆菌Rosetta(DE3),培养至OD_(600)为0.4时加入IPTG以诱导5LO△112重组蛋白表达,目的蛋白经纯化后免疫新西兰大白兔制备其多克隆抗体。结果:使用BugBuster蛋白提取试剂裂解细菌并获得纯度较高的包涵体,包涵体用含6mol/L盐酸胍的溶液变性溶解,再经Ni-NTA agarose亲和纯化得到高纯度的5LO△112重组蛋白。用该蛋白免疫新西兰大白兔获得5-LO的特异性抗体,该抗体的效价为1∶51200。结论:使用6mol/L盐酸胍溶解包涵体蛋白结合Ni-NTA agarose亲和纯化的方法成功获得了纯度较高的5LO△112重组蛋白,并用此蛋白制备了高效价的多克隆抗体。

主 题 词：人5-脂氧合酶 包涵体蛋白 亲和纯化 多克隆抗体制备 

学科分类：10[医学] 

D　O　I：10.19381/j.issn.1001-7585.2024.11.002

馆 藏 号：203128189...