弓形虫表面主要抗原1(SAG1)蛋白的原核表达与鉴定

作     者：代琴 骆璐 董春霞 凌洪权 吴胜昔 曾政 秦萍 韦广苗 DAI Qin;LUO Lu;DONG Chunxia;LING Hongquan;WU Shengxi;ZENG Zheng;QIN Ping;WEI Guangmiao

作者机构：重庆理工大学药学与生物工程学院重庆400054 重庆市动物疫病预防与控制中心重庆401120 

基　　金：重庆理工大学研究生创新基金项目(gzlcx 20223354) 大学生创新创业训练计划项目(2022CX204,2022CX205) 重庆市现代农业产业技术体系创新团队项目(CQMAITS202314) 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2024年第12期

页      码：69-73,128页

摘      要：为了实现弓形虫主要表面抗原1(surface antigen 1,SAG1)蛋白在原核表达系统中的高效表达,试验根据GenBank中弓形虫SAG1基因序列(登录号为S76248.1)及大肠杆菌密码子偏好性对目的基因序列进行优化设计,以pET-32a(+)为表达载体构建重组表达质粒pET32a(+)-SAG1,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)对重组菌进行诱导,表达重组蛋白,通过优化诱导条件实现对重组蛋白的大量表达,使用NGC^(TM)层析纯化系统纯化重组蛋白,并分别以抗His标签单克隆抗体和犬弓形虫阳性血清作为一抗、羊抗鼠IgG-HRP和HRP-兔抗犬作为二抗对重组蛋白进行Western-blot鉴定。结果表明:重组表达质粒pET32a(+)-SAG1经双酶切分别在5 900 bp和1 020 bp处出现1条载体条带和1条目的基因条带,与预期结果相符;重组蛋白大小为55 ku且以包涵体的形式成功表达,当诱导条件为25℃、0.4 mmol/L IPTG诱导8 h时重组蛋白的表达量最高;纯化后的重组蛋白条带单一,纯度较高,3个样品质量浓度分别为0.409 5,0.368 5,0.451 9 mg/mL;表达的重组蛋白与抗His标签单克隆抗体和犬弓形虫阳性血清均能特异性结合。说明在大肠杆菌中成功表达了弓形虫SAG1重组蛋白,纯化后的重组蛋白纯度和质量浓度较高,且具有良好的反应原性。

主 题 词：弓形虫 SAG1 原核表达 镍柱纯化 蛋白免疫印迹 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2023.07.0120

馆 藏 号：203128243...