3-OH根皮苷酶法制备及其抗白癜风作用研究

作     者：雷晶鹏 汪鋆植 余海立 谢阳 邓张双 邓改改 杨梦瑶 许培勇 税先樊 LEI Jingpeng;WANG Junzhi;YU Haili;XIE Yang;DENG Zhangshuang;DENG Gaigai;YANG Mengyao;Xu Peiyong;SHUI Xianfan

作者机构：天然产物研究与利用湖北省重点实验室(三峡大学)宜昌443002 湖北安琪酵母股份有限公司宜昌443003 湖北省巴东县官渡口镇农业服务中心宜昌444399 

基　　金：湖北农业土著品种基因资源多样性保护与可持续利用项目资助(HBGC-2021-167C) 

出 版 物：《中国药学杂志》 (Chinese Pharmaceutical Journal)

年 卷 期：2024年第59卷第11期

页      码：1011-1022页

摘      要：目的设计优化3-OH根皮苷酶法制备工艺,探究3-OH根皮苷体内抗白癜风活性,为实现3-OH根皮苷的量产及白癜风防治提供科学依据。方法以湖北海棠嫩叶水提液中根皮苷为底物,在含抗坏血酸、多酚氧化酶(PPO)粗酶液的体系中制备3-OH根皮苷。以3-OH根皮苷的摩尔产率为指标,选取根皮苷浓度、pH、温度、反应时间、抗坏血酸浓度、酶浓度、搅拌速度等因素,通过单因素试验、普拉克特-伯曼(PB)试验、最陡爬坡试验、中心综合设计(CCD)-效应面法等方法,优化3-OH根皮苷制备工艺条件,反应体系放大至250 L验证制备工艺可行性。外用氢醌乳膏涂抹C57BL/6小鼠背部皮肤构建白癜风模型,连续造模75 d,造模第20天将小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药8-甲氧补骨脂素组(8-mop,4.25 mg·kg^(-1))、3-OH根皮苷低、中、高剂量组(10、20、40 mg·kg^(-1)),灌胃给药55 d,各组小鼠每5d脱毛1次,同时对造模区域进行摄像,毛发脱色评分。给药结束后摘眼球取血,使用试剂盒检测小鼠血清酪氨酸酶(TYR)、胆碱酯酶(CHE)活性、丙二醛(MDA)含量。取小鼠背部皮损处皮肤,切片经苏木精-伊红(HE)染色,在光学显微镜下观察50个毛囊,对含有黑色素的毛囊进行计数。结果3-OH根皮苷的最佳制备工艺为:根皮苷1.70 mmol·L^(-1)、反应时间6.0 h、PPO浓度25.0 U·mL^(-1)。放大实验,反应液经大孔树脂除杂,浓缩,干燥得纯度为70.32%的3-OH根皮苷粗品334.80 g,提取率为8.37%,进一步分离纯化可得到纯度为98.10%的3-OH根皮苷纯品,得率为68.50%。体内活性实验表明,与模型组相比,3-OH根皮苷低、中、高剂量组小鼠毛发脱色情况显著改善,毛发脱色评分显著降低(P<0.05)、血清MDA含量、CHE活性显著降低(P<0.05),含黑色素毛囊个数、血清TYR活性显著上升(P<0.05)。结论可通过湖北海棠嫩叶水提液酶法高效提取制备3-OH根皮苷,且具有量化生产的可行性。3-OH根皮苷具有治疗白癜风的活性,其作用机制与提升酪氨酸酶活性,增加黑色素合成;改善氧化应激损伤,延缓白癜风的发展相关。

主 题 词：3-OH根皮苷 湖北海棠 白癜风 酪氨酸酶 

学科分类：1007[医学-药学类] 1006[医学-中西医结合类] 100706[100706] 100602[100602] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.11669/cpj.2024.11.008

馆 藏 号：203128263...