猪圆环病毒2型LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法的建立与应用

作     者：毛首会 杜国玉 刘晓波 吴锦艳 兰喜 何继军 尚佑军 王桂琴 刘永杰 MAO Shouhui;DU Guoyu;LIU Xiaobo;WU Jinyan;LAN Xi;HE Jijun;SHANG Youjun;WANG Guiqin;LIU Yongjie

作者机构：中国农业科学院、兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州1730046 宁夏大学农学院宁夏银川750021 

基　　金：国家生猪技术创新中心先导科技项目(NCTIP-XD/C03) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2024年第54卷第6期

页      码：728-734页

摘      要：本研究旨在建立一种快速、准确且易于操作的猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)检测方法。首先以PCV2的ORF2基因作为靶基因,设计4条LAMP与5条CRISPR特异性引物,再分别优化获得LAMP反应体系和CRISPR检测体系中各成分最佳配比浓度,经过特异性、灵敏度、重复性以及符合性验证,最终建立了快速检测PCV2的LAMP-CRISPR/Cas12a方法。结果显示,该方法最小检测量接近1 copy质粒DNA,灵敏度远高于本实验室常用的PCR方法,且在相同条件下只有PCV2呈阳性结果,其他均呈现阴性,表明特异性良好。同时该方法具有良好的重复性,批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%,该方法与qPCR之间的符合率较高,可通过肉眼观察在蓝光下的反应产物判断结果。结果表明,建立的LAMP-CRISPR/Cas12a体系适用于PCV2的快速检测。

主 题 词：猪圆环病毒2型 CRISPR/Cas12a检测 环介导等温扩增 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2024.0116

馆 藏 号：203128281...