粉防己细胞色素P450基因StCYP80G的克隆与生物信息学分析

作     者：高雨 李姚婷 冯郁涵 康云 黄建明 翁伟宇 GAO Yu;LI Yaoting;FENG Yuhan;KANG Yun;HUANG Jianming;WENG Weiyu

作者机构：华东理工大学药学院上海市新药设计重点实验室上海200237 复旦大学药学院上海201203 

出 版 物：《中草药》 (Chinese Traditional and Herbal Drugs)

年 卷 期：2024年第55卷第13期

页      码：4508-4515页

摘      要：目的克隆粉防己Stephania tetrandra苄基异喹啉类生物碱生物合成途径中的细胞色素P450基因StCYP80G,进行生物信息学分析、表达载体构建和组织特异性表达分析。方法设计特异性引物,从粉防己cDNA中克隆得到StCYP80G编码蛋白的基因序列;利用生物信息学在线工具预测StCYP80G蛋白的结构域、理化性质和跨膜区等分子特征;利用MEGA11.0对氨基酸进行多序列比对和系统进化关系分析;通过同源重组法构建含有StCYP80G基因的重组质粒;采用实时荧光定量PCR技术分析该基因在粉防己不同组织中的相对表达量。结果StCYP80G基因开放阅读框长度为1458 bp,编码485个氨基酸,蛋白质相对分子质量为54770,预测其具有CYP450的保守结构域,含有跨膜结构域,可能定位在内质网上。氨基酸序列比对与系统进化树分析显示,StCYP80G与莲NnCYP80G、智利桂Ls CYP80G的序列具有同源性且一致度较高,推测StCYP80G与这2条序列具有相似的功能。StCYP80G基因在粉防己叶中表达量显著高于根中。质粒序列分析结果表明,重组质粒pESC-Leu-StCYP80G构建成功。结论StCYP80G基因的克隆、生物信息学分析、重组质粒的构建、以及组织表达特异性的研究结果,为进一步探究其在苄基异喹啉类生物碱生物合成途径中的功能奠定了基础。

主 题 词：粉防己 细胞色素P450 基因克隆 生物信息学分析 基因表达 荧光定量PCR 

学科分类：1008[医学-中药学类] 1006[医学-中西医结合类] 100602[100602] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.7501/j.issn.0253-2670.2024.13.022

馆 藏 号：203128374...