华支睾吸虫LAMP方法的建立与初步应用

作     者：孙晓敬 马茜 田甜 张磊 刘丽君 姚佳 汪洋 SUN Xiaojing;MA Xi;TIAN Tian;ZHANG Lei;LIU Lijun;YAO Jia;WANG Yang

作者机构：西安医学院基础医学部病原生物学教研室西安710021 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(32070069) 陕西省科技厅青年基金项目(2021JQ-781) 陕西省自然科学基础研究计划青年项目(2024JQYBQN-0176) 陕西省教育科学“十四五”规划课题一般项目(SGH21Y0266) 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2024年第13期

页      码：47-51页

摘      要：为了建立华支睾吸虫环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测方法,试验利用GenBank中华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的线粒体全基因组设计特异性引物,然后构建LAMP方法,并验证了LAMP方法的特异性和敏感性;以及用粪便镜检(金标准)、PCR和LAMP方法同时检测45份犬粪便样本,评价LAMP方法的检测效果。结果表明:经序列比对,筛选得到华支睾吸虫特异性基因Unit R2,以该基因序列为靶标构建检测方法,优化后的总体积为50μL,Bst3.0 DNA聚合酶的最适用量为1μL,MgSO_(4)的最适浓度为6 mmol/L,最佳反应温度为63℃,最佳反应时间为40 min。构建的LAMP方法可以检测华支睾吸虫整个生命发育周期,实现了对其成虫、嚢蚴及虫卵的全方位覆盖;与其他种类寄生虫无交叉反应;对基因组DNA的最低检测限为10 fg,是PCR方法的100倍;与金标准相比,LAMP方法的特异性为100%(30/30),敏感性为93.33%(14/15)。说明试验建立的华支睾吸虫LAMP方法特异性强、敏感性高、检测结果准确,具有快速检测华支睾吸虫的潜力。

主 题 词：华支睾吸虫 环介导等温扩增(LAMP) 线粒体基因组 核酸 检测 

学科分类：090601[090601] 1001[医学-基础医学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2024.01.0017

馆 藏 号：203128557...