绵羊PLC-γ1基因shRNA慢病毒干扰载体的构建及鉴定

作     者：陈云蕾 袁利明 丁林玲 刘素平 袁伟琴 赛务加甫 CHEN Yunlei;YUAN Liming;DING Linling;LIU Suping;YUAN Weiqin;Saiwujiafu

作者机构：石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 桐庐县无规定马属动物疫病区管理中心杭州311599 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 

基　　金：国家自然科学基金项目(31860725) 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2024年第13期

页      码：52-58页

摘      要：为了构建绵羊PLC-γ1基因shRNA慢病毒干扰载体,并在人胚肾细胞(HEK-293T细胞)中筛选及鉴定载体干扰效果,试验采用Invitrogen BLOCK-iTTM RNAi Designer在线软件设计PLC-γ1基因的4条shRNA干扰序列(PLC-γ1-shRNA-1~4)和1条阴性对照序列(PLC-γ1-shRNA-NC),将其分别克隆至慢病毒干扰载体pLentiLox3.7(pLL3.7)中构建PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体,用其转染HEK-293T细胞,48 h后通过倒置荧光显微镜观察荧光蛋白表达情况,并利用实时荧光定量PCR法和Western-blot检测HEK-293T细胞中PLC-γ1基因和蛋白质的表达情况,筛选出干扰效率最高的PLC-γ1-shRNA干扰序列并计算慢病毒含量。结果表明:试验成功设计出PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体,大小为120 bp。PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体均具有较高的干扰效率,在倒置荧光显微镜下均可观察到绿色荧光蛋白表达,其中PLC-γ1-shRNA-2序列的干扰效率最高,其PLC-γ1基因和蛋白质的相对表达量最低,极显著低于PLC-γ1-shRNA-NC的干扰(P<0.01),慢病毒含量为1.1×10^(7)IU/mL。说明针对PLC-γ1基因筛选出的PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体从基因和蛋白质水平上均能有效地抑制PLC-γ1的表达。

主 题 词：shRNA PLC-γ1 绵羊 慢病毒 干扰 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

D　O　I：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2023.05.0200

馆 藏 号：203128570...