鸡毒支原体和滑液囊支原体双重基础RPA检测方法的建立

作     者：田兴苗 王健霖 戴莎莎 郭磊 司朵朵 龚振兴 李继东 TIAN Xingmiao;WANG Jianlin;DAI Shasha;GUO Lei;SI Duoduo;GONG Zhenxing;LI Jidong

作者机构：宁夏大学动物科技学院宁夏银川750021 宁夏晓鸣农牧股份有限公司宁夏银川750011 

基　　金：宁夏回族自治区科技创新团队建设项目(2022BSB03107) 宁夏银川市校企联合创新专项(2022XQ009) 宁夏大学产教融合研究生联合培养示范基地建设项目 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2024年第54卷第7期

页      码：905-914页

摘      要：鸡毒支原体(MG)和滑液囊支原体(MS)是对家禽危害最大的两种支原体,本研究拟建立基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的MG、MS双重检测方法。以MG的mgc2基因、MS的vlhA基因为检测靶标设计数对引物,通过筛选得到最佳引物,优化反应时间和反应温度以确定最佳反应条件,通过优化MG、MS最佳引物配比确定双重基础RPA的反应体系,并进行灵敏度、特异性、重复性试验,用所建方法对120份临床样品进行检测。结果显示,建立的MG、MS双重基础RPA检测方法在37℃下反应20 min即可完成扩增,其最佳引物配比为0.6∶1.4。以重组质粒为模板时,MG、MS的最低检出限分别为3.75 copies/μL、3.46copies/μL;以基因组DNA为模板时,MG、MS的最低检出限分别为1.23×10^(-3)ng/μL、5.68×10^(-3)ng/μL。该方法具有良好的特异性和稳定性。分别用该方法与OIE推荐的单重PCR方法检测120份临床样品,结果表明,该方法的检出率高于OIE的PCR方法,与OIE的PCR方法一致性较强。上述结果表明,建立的MG、MS双重基础RPA检测方法具有操作简单、反应快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好的优点,可实现临床MG、MS感染的鉴别诊断。

主 题 词：鸡毒支原体 滑液囊支原体 重组酶聚合酶扩增技术 检测方法 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2024.0097

馆 藏 号：203128582...