云南烟草曲叶病毒LAMP快速检测体系的建立及初步应用

作     者：赵正婷 盖晓彤 张俊蕾 夏振远 刘弟 刘雅婷 姜宁 ZHAO Zheng-Ting;GE Xiao-Tong;ZHANG Jun-Lei;XIA Zhen-Yuan;LIU Di;LIU Ya-Ting;JIANG Ning

作者机构：云南省烟草农业科学研究院 云南农业大学农学与生物技术学院 云南农业大学植物保护学院 云南农业大学烟草学院 

基　　金：国家自然科学基金(32260681) 云南省烟草公司科技计划项目(2021530000242031) 云南省科技厅基础研究专项(202101AU070129) 

出 版 物：《农业生物技术学报》 (Journal of Agricultural Biotechnology)

年 卷 期：2024年第32卷第8期

页      码：1949-1958页

摘      要：云南烟草曲叶病毒（Tobacco leaf curl Yunnan virus, TbLCYnV）是在中国云南保山烟草（Nicotiana tabacum）上发现的菜豆金色花叶病毒属新病毒，是云南烟草曲叶病的重要病原之一。为快速检测TbLCYnV，本研究根据TbLCYnV的外壳蛋白（coat protein, CP）基因保守核苷酸序列，设计了5组引物进行筛选，并采用单一变量法对环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）反应温度、时间，体系中甜菜碱、dNTPs、Mg2+的体积摩尔浓度、内外引物比等进行逐一优化，同时与传统PCR平行对比以验证LAMP的特异性和灵敏度，应用田间采集样品验证LAMP体系的实用性，确立了Tb LCYnV的LAMP检测最佳体系。结果表明，最佳引物组为TbL-5，最适反应温度为60℃，甜菜碱、d NTPs、Mg2+的最佳终浓度分别为1.0、0.4和4.0 mmol/L，最佳内外引物浓度比为4∶1，最佳反应时间60 min。检测结果显示优化后的LAMP经SYBR GreenⅠ染色可通过肉眼直接判断结果，具有高度特异性，且灵敏度是常规PCR的10 000倍。本研究为TbLCYnV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法，对于Tb LCYnV的早期快速诊断和防控具有重要意义。

主 题 词：云南烟草曲叶病毒(TbLCYnV) 外壳蛋白(CP)基因 环介导等温扩增(LAMP) 特异性 灵敏度 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 090402[090402] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-7968.2024.08.021

馆 藏 号：203128773...