连接酶检测反应法检测乙型肝炎病毒核苷(酸)类似物耐药突变的可行性

作     者：孙艺艳 吴月平 毛丽萍 陆建荣 陈琳 陆仁飞 

作者机构：江苏省南通市第三人民医院226006 

出 版 物：《检验医学与临床》 (Laboratory Medicine and Clinic)

年 卷 期：2012年第9卷第21期

页      码：2737-2739页

摘      要：目的探讨依据寡核苷酸等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)扩增及连接酶检测反应(LDR)方法检测乙型肝炎病毒(HBV)4种核苷(酸)类似物耐药突变的可行性。方法以基因库公布的981条HBV基因序列为基础,针对拉米夫啶、替比夫啶、阿德福韦和恩替卡韦8个耐药位点上的氨基酸替换形式,设计15对特异性引物,采用多重PCR扩增HBV P基因区野生型和突变型目的片段,然后进行多重LDR,最后在ABI3130测序仪上电泳,根据内参标记、LDR产物的长度进行结果判读。应用此方法对12例慢性HBV感染患者血清进行检测,同时采用荧光PCR、焦磷酸测序技术对其验证,判断其特异性和准确性。结果 LDR法能有效区分包括rtL180M、YMDD、YIDD、YVDD、rtA181V/T、rtN236T、rtT184G、rtS202I、rtM250V野生株和部分突变株;4例HBV DNA>106copy/mL患者检测出野生株和突变株,结果与焦磷酸测序一致;LDR法与荧光PCR法检测结果一致率达83.3%(10/12)。结论血清HBV DNA>106 copy/mL时结合多重PCR的复合LDR可通过一次扩增检测产物中的多个单突变或野生型位点,有助于核苷(酸)类似物耐药的诊断和治疗。

主 题 词：乙型肝炎病毒 连接酶检测反应 突变 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-9455.2012.21.043

馆 藏 号：203128810...