猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ^-/Amp^r突变株的构建

作     者：贝为成 何启盖 陈焕春 徐晓娟 洪文洲 肖少波 宋云峰 刘建杰 

作者机构：华中农业大学动物医学院动物病毒室武汉430070 

基　　金：湖北省科技攻关项目 (2 0 0 1AA2 0 1B0 2 ) 国家自然科学基金资助 (3 0 2 0 0 0 1 1 ) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2004年第35卷第2期

页      码：186-191页

摘      要：根据已发表的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清5型核苷酸序列设计并合成了一对引物,从自行分离的APP菌株PCR扩增apxⅡCA基因,将该片段与pBluescriptSK(+)载体连接,得到质粒pSK CA。另外,从质粒pIC neo中得到的Ampr基因经XbaⅠ酶切消化后,克隆到pSK CA中的XbaⅠ位点,获得了重组转移质粒pSK CAmpr。pSK CAmprDNA通过电转化导入亲本菌,电转化后的产物涂布于TM平板,可获得突变株。提取突变株和亲本菌基因组DNA,用PCR检测含有apxⅡC基因的胸膜肺炎放线杆菌染色体区域。从突变株基因组DNA扩增得到的一条PCRDNA片段比从亲本菌基因组DNA扩增得到的一条DNA片段大1 3kb,增大的片段与所插入的Ampr基因大小相符合。用合成的Ampr基因引物从突变株基因组DNA中也能扩增到一条1 3kb的特异性DNA片段。同时South ernblot鉴定有特异性带。这表明我们所构建的突变株是成功的。测定了突变株的遗传稳定性及突变株对动物的安全性,为进一步研究用其它报告基因置换Ampr基因后,研制单基因工程疫苗及以APP毒力缺失突变菌株为载体,表达外源基因的APP基因工程菌的研究奠定了坚实的基础。

主 题 词：猪 传染性胸膜肺炎 放线杆菌 apxⅡ^-/Amp^r突变株 基因构建 基因工程疫苗 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0366-6964.2004.02.014

馆 藏 号：203129020...