牛轮状病毒VP7基因荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作     者：魏锁成 巩转娣 车团结 田风林 WEI Suo-cheng;GONG Zhuan-di;CHE Tuan-jie;TIAN Feng-lin

作者机构：西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州7300030 西北民族大学医学院附属医院甘肃兰州730030 兰州百源基因技术有限公司甘肃兰州730000 

基　　金：2007年甘肃省科技支撑计划项目(0708NKCA079) 甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目(GNSW-2010-10) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2013年第35卷第2期

页      码：151-154页

摘      要：为建立快速特异的定量检测牛轮状病毒(BRV)VP7基因的荧光定量PCR检测方法,本研究设计扩增BRV VP7基因的特异性引物,将扩增的VP7基因片段(342 bp)克隆于pMD18-T载体中(pMD-VP7),作为重组质粒标准品,建立EvaGreen荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法。经反应条件优化,结果表明该方法的最低检测量为8.03拷贝/μL。该方法对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、猪流行性腹泻病毒及牛结核分枝杆菌的检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性。批内和批间重复变异系数均小于3%。采用该方法对12份ELISA阳性样本检测出10份阳性,符合率83.33%。本研究建立的BVR VP7 qRT-PCR检测方法具有特异、灵敏、快速和对标本的检测能力较强等特点,可以用于临床诊断和流行病学调查。

主 题 词：轮状病毒 VP7基因 实时荧光定量PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.2013.02.17

馆 藏 号：203130353...