巢式PCR联合焦磷酸测序检测乙肝病毒耐药基因的方法建立和初步临床应用

作     者：刘玲 李从荣 郑毅 赵友云 LIU LING;LI CONG-RONG;ZHENG YI;ZHAO YOU-YUN

作者机构：武汉大学人民医院检验科湖北武汉430060 湖北省中医院检验科 

出 版 物：《中西医结合肝病杂志》 (Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine on Liver Diseases)

年 卷 期：2013年第23卷第3期

页      码：167-169,182页

摘      要：目的:建立用巢式PCR联合焦磷酸测序技术检测HBV核苷类似物耐药基因的检测方法。方法:针对HBV P基因RT区的8个耐药位点,在其上下游分别设计两对特异性引物,构建巢式PCR扩增体系。并初步运用该方法结合焦磷酸测序对223例慢性乙型肝炎(CHB)患者进行8个耐药位点的检测和HBV基因分型。结果:本研究所建立的巢式PCR联合焦磷酸测序检测技术的最低检测下限为2×103copies/ml,在对临床样本的检测中,所有样本均能扩增出阳性条带。192例使用核苷类似物(用药组)CHB患者中,153例(79.7%)为B型HBV,39例(20.3%)为C型HBV。53例(27.6%)产生耐药突变,其中30.1%(16例)发生204位点突变,发生180位点、181位点突变的均为5.6%(3/53),3.8%(2/53)发生236位点突变,1.9%(1/53)发生202位点突变;37.7(20/53)同时发生180/204位点突变,同时发生181/236、204/250位点突变的均为3.8%(2/53);同时发生3个位点突变的占7.5%(173/180/240、180/181/204、180/184/204、180/202/204各1例)。未用药组31例CHB患者中25例(80.6%)为B型HBV,6例(19.4%)为C型HBV,未发现耐药突变的现象。结论:本检测方法能同时对HBV进行基因分型和多个耐药突变位点进行检测,对抗病毒药物的选用和疗效判断有重要的指导意义,适于临床推广使用。

主 题 词：肝炎病毒,乙型 巢式PCR 焦磷酸测序 耐药突变 

学科分类：100208[100208] 1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-0264.2013.03.014

馆 藏 号：203130372...