Robo1基因miR-218靶位点序列克隆及其突变体构建

作     者：章倩倩 丁一 王丽京 ZHANG Qian-Qian;DING Yi;WANG Li-Jing

作者机构：广东药学院血管生物学研究所广东广州510006 

基　　金：国家自然科学基金(31200896) 广东省自然科学基金(S2012040007658) 广东省医学科研基金(B2012181) 

出 版 物：《中国老年学杂志》 (Chinese Journal of Gerontology)

年 卷 期：2013年第33卷第15期

页      码：3646-3648页

摘      要：目的克隆Robo1基因3 UTR的miR-218靶位点区域序列并构建"seed"区位点突变体,以便进一步研究miR-218对Robo1基因的调控作用。方法通过targetscan 6.2对Robo1 3 UTR进行分析找出miR-218靶位点,根据NCBI GenBank中Robo1 mRNA序列设计引物,利用RT-PCR技术从人类细胞总RNA中对包含miR-218靶位点的序列进行克隆;并设计一对突变引物,通过重叠PCR法获得"seed"区点突变基因序列;通过双荧光报告基因检测miR-218对Robo1基因的调控。结果经测序验证,成功克隆了目的基因序列,并成功构建了"seed"区点突变体,并且通过报告基因检测发现miR-218对Robo1表达有显著抑制(P<0.05)。结论成功克隆了含有miR-218靶位点的Robo1 3 UTR基因序列及构建了"seed"区点突变体,并阐明miR-218直接作用于Robo1基因3 UTR区,为进一步研究miR-218对Robo1基因的转录后调控机制奠定了基础。

主 题 词：Robo1 miR-218 靶位点 突变体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-9202.2013.15.045

馆 藏 号：203130375...