一种随机引物联合多特异性DNA片段检测结核分支杆菌的新方法

作     者：黄威 邢益平 严有德 严玉娟 艾月梅 HUANG Wei;XING Yi-ping;YAN You-de;YAN Yu-juan;AI Yue-mei

作者机构：南京医科大学第一附属医院感染科江苏南京210029 

基　　金：2011年江苏省医学创新团队基金项目(LJ201121) 

出 版 物：《现代生物医学进展》 (Progress in Modern Biomedicine)

年 卷 期：2014年第14卷第29期

页      码：5609-5616页

摘      要：目的:针对目前结核性疾病实验室诊断的局限性,探索一种更为敏感和特异的结核分枝杆菌DNA检测新方法。方法:选取10株江苏地区流行的结核分支杆菌(MTB)菌株,选取临床其他常见菌株及分枝杆菌菌株作为对照组,分别提取DNA作为随机引物的模板。参考国内、外文献设计12条随机引物,并分别对MTB及对照菌株进行单个引物随机扩增,2%的琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行分离并切胶纯化,通过TA克隆将纯化片段连接到质粒pEASYTM-T5 Zero并进行测序,通过BLAST-nr比对验证是否为MTB DNA片段。按照所确定的MTB片段序列,在其内部设计、合成一对特异性引物。用此特异性引物扩增对应的随机引物扩增产物,获得MTB特异性条带图谱。并将该方法检测的敏感性和特异性与临床上常用的real-time PCR进行比较。结果:经BLAST-nr比对,随机引物IS986F,S535及IS986R扩增的条带与MTB DNA有高度同源性(均为99%)。随机引物IS986F、S535和IS986R分别联合其特异性引物可以检测稀释105倍、105倍和103倍的MTB DNA,其特异性分别为100%、90%和80%。常规real-time PCR可检测出稀释104倍的MTB DNA。结论:随机引物IS986F联合其特异性引物检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性优于S535、IS986R两组,特异性为100%,且灵敏度优于常规real-time PCR法。

主 题 词：结核分支杆菌 RAPD 特异性DNA片段 PCR 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13241/j.cnki.pmb.2014.29.003

馆 藏 号：203130439...