重组瑞替普酶包涵体制备及其体外复性

作     者：王俊雄 关怡新 姚善泾 WANG Junxiong;GUAN Yixin;YAO Shanjing

作者机构：浙江大学化学工程与生物工程学院浙江杭州310027 

基　　金：国家自然科学基金项目(21036005)~~ 

出 版 物：《化工学报》 (CIESC Journal)

年 卷 期：2015年第66卷第2期

页      码：709-716页

摘      要：将携带重组瑞替普酶(reteplase,rt-PA)的质粒成功转化到大肠杆菌BL21(DE3)后,诱导表达获得包涵体,考察了诱导剂浓度、培养温度和培养时间等条件对目标蛋白表达量的影响。在此基础上,对高效表达的rt-PA包涵体体外复性过程进行了详细研究。首先利用单因素实验考察了复性液p H、GSH浓度、GSH/GSSG比例、蛋白浓度等各种复性条件对复性效果的影响;并结合正交实验设计,进一步研究了高蛋白浓度下复性后rt-PA酶活变化情况。以0.2 mmol·L-1 IPTG诱导,在33℃下培养6 h,每升发酵液约可获得1.7 g粗制包涵体。适宜的复性条件为蛋白浓度50μg·ml-1,p H 10.0,GSH浓度1 mmol·L-1,GSH/GSSG比例8,复性收率为87.2%。影响高蛋白浓度下rt-PA复性的关键因素为复性液初始p H及GSH浓度,在800μg·ml-1蛋白浓度下复性后rt-PA比活可达7.54×104 IU·mg-1,荧光光谱分析结果表明复性后rt-PA恢复了其天然态结构。

主 题 词：生物分离 蛋白质复性 二硫键 正交实验设计 瑞替普酶 

学科分类：081704[081704] 0817[工学-轻工类] 08[工学] 081701[081701] 0703[理学-化学类] 

核心收录：

D　O　I：10.11949/j.issn.0438-1157.20141141

馆 藏 号：203130453...