实时荧光单引物等温扩增检测阪崎克罗诺杆菌方法的建立

作     者：李静 段永生 王建昌 孙晓霞 胡连霞 LI Jing;DUAN Yong-sheng;WANG Jian-chang;SUN Xiao-xia;HU Lian-xia

作者机构：河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心河北石家庄050051 

基　　金：质检公益性科研专项项目(201210128 201310126) 

出 版 物：《中国食品卫生杂志》 (Chinese Journal of Food Hygiene)

年 卷 期：2015年第27卷第5期

页      码：524-530页

摘      要：目的建立实时荧光单引物等温扩增(SPIA)检测阪崎克罗诺杆菌的方法。方法本文以阪崎克罗诺杆菌Omp A基因特异序列为靶序列,设计RNA-DNA组合引物和链终止序列,优化反应体系,对4株不同来源阪崎克罗诺杆菌和21株其他食源性致病菌进行实时荧光SPIA特异性分析,通过不同浓度梯度阪崎克罗诺杆菌菌悬液灵敏度的检测和添加有阪崎克罗诺杆菌的婴儿配方奶粉样品检出限的确定,评价方法的准确度。结果除4株阪崎克罗诺杆菌外,其他细菌均未出现特异性荧光扩增曲线,具有良好的特异性。在40 min内,实时荧光SPIA检测阪崎克罗诺杆菌纯培养基因拷贝灵敏度为每反应1 copies,相应活菌数为1.6×10-1cfu/ml;对婴儿配方奶粉模拟样品中阪崎克罗诺杆菌的检出限是1.5×100cfu/100 g。结论本研究建立的方法具有灵敏度高、特异性强、耗时短、操作简单等优点,适用于实验室快速检测阪崎克罗诺杆菌Omp A基因。

主 题 词：实时荧光 单引物 等温扩增 阪崎克罗诺杆菌 Omp A基因 婴儿配方奶粉 食源性致病菌 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100403[100403] 10[医学] 

D　O　I：10.13590/j.cjfh.2015.05.009

馆 藏 号：203130481...