鸡毒支原体和滑液囊支原体双重LFD-RPA快速检测方法的建立

作     者：田兴苗 王健霖 郭磊 司朵朵 龚振兴 李继东 TIAN Xing-miao;WANG Jian-lin;GUO Lei;SI Duo-duo;GONG Zhen-xing;LI Ji-dong

作者机构：宁夏大学动物科技学院银川750021 宁夏晓鸣农牧股份有限公司银川750011 

基　　金：宁夏回族自治区科技创新团队建设项目(2022BSB03107) 宁夏银川市校企联合创新专项(2022XQ009) 宁夏大学产教融合研究生联合培养示范基地建设项目 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2024年第40卷第7期

页      码：117-124页

摘      要：【目的】鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)和滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是对家禽危害最大的两种支原体,MG、MS的早期诊断是预防和控制禽支原体的关键环节。通过将重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)和测流层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD)相结合,建立一种操作便捷、反应快速、结果可视化、可同时检测MG、MS两种病原的快速检测方法。【方法】基于MG的mgc2基因、MS的vlhA基因设计特异性引物和探针,优化反应时间、反应温度及引物配比建立双重LFD-RPA快速检测方法,评价其灵敏度、特异性、稳定性,同时对120份临床样品进行检测。【结果】双重LFD-RPA检测方法在37℃下反应5-10min即可完成扩增,其RPA-MG-F2/R2、RPA-MS-F1/R1最佳引物配比为0.6∶1.4。MG、MS的最低检出限分别为3.75 copies/μL、3.46 copies/μL。用该方法与OIE推荐的PCR方法对120份样品进行检测,二者符合率为93.3%。【结论】MG、MS双重LFD-RPA检测方法在恒温条件下即可完成扩增,其操作简单、反应快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好,无需使用任何仪器即可观察到结果,适用于基层MG、MS单独感染或混合感染的现场快速检测。

主 题 词：鸡毒支原体 滑液囊支原体 重组酶聚合酶扩增技术 测流层析试纸条 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2023-1107

馆 藏 号：203130864...