海洋黄杆菌来源岩藻多糖酶Fcn1的异源表达及酶学性质

作     者：王立平 武俊义 王莹 秦敏 陈芊汝 陈铁军 WANG Liping;WU Junyi;WANG Ying;QIN Min;CHEN Qianru;CHEN Tiejun

作者机构：青岛农业大学食品科学与工程学院山东青岛266109 

基　　金：山东省青年自然科学基金资助项目(ZR2021QC042) 青岛农业大学人才引进项目(665/1120037) 

出 版 物：《食品科学技术学报》 (Journal of Food Science and Technology)

年 卷 期：2024年第42卷第4期

页      码：135-144页

摘      要：为了寻找和挖掘降解岩藻多糖的新型酶,以从海带中筛选获得的一株可以降解岩藻多糖的海洋黄杆菌Flavobacterium ***2-3为研究对象,对其进行了全基因组测序。通过与已报道的岩藻多糖酶氨基酸序列比对,并进行转录组学分析及实时荧光定量PCR验证,挖掘了1个可能的岩藻多糖酶基因,并将其命名为Fcn1。Fcn1基因全长1221 bp,编码406个氨基酸,蛋白分子质量约为46.8 kDa。通过引物设计、PCR扩增,将Fcn1基因克隆,进一步构建了Fcn1基因异源表达载体Fcn1-pET-28a(+),并将其成功地在大肠杆菌BL21(DE3)表达宿主中进行了诱导表达。所得重组酶Fcn1通过带有His标签的镍柱进行分离纯化,采用铁氰化钾法测定纯化酶酶解岩藻多糖的比酶活(332 U/mg),纯化倍数为2.25。酶学性质研究表明,重组酶Fcn1最适反应温度为50℃,最适反应pH值为8.0,在20~30℃和pH值为7.0~8.0时表现出较好的稳定性。结合酶学性质研究结果,确定酶的最适反应条件为30℃,pH值为8.0,并测定了岩藻多糖酶水解反应的动力学参数,K m为1.17 mg/mL,V_(max)为10.53 g·L^(-1)·min^(-1)。该酶降解岩藻多糖的酶活力较高,在岩藻多糖资源的开发领域具有较大应用潜力。

主 题 词：海洋黄杆菌 岩藻多糖酶 基因克隆 异源表达 蛋白纯化 酶学性质 

学科分类：0832[0832] 08[工学] 083201[083201] 

核心收录：

D　O　I：10.12301/spxb202300442

馆 藏 号：203130873...